八聚体蛛丝蛋白基因毛囊特异性表达载体的构建及其转基因研究

【摘要】蜘蛛丝具有质量轻、强度高及韧性大等优越特性,由于其开发利用难度大,因此借助生物工程技术生产蛛丝原材料成为首选方法。八聚体蛛丝蛋白基因是由人工合成的拟蜘蛛拖丝蛋白基因的核心序列S连接成的八聚体(Spidroinl8,8S),为了进一步探究8S基因的功能及特性,本实验构建了毛囊细胞中特异性表达8S基因的载体,并转染了小鼠表皮细胞和绒山羊胎儿成纤维细胞,验证了启动子的表达能力；通过转染小鼠胚胎干细胞获得阳性克隆,为嵌合体小鼠的制备奠定基础,并运用原核注射方法,制备了8s转基因小鼠,为研究8S对毛发特性的影响提供了研究基础。1.8S基因毛囊特异性表达载体pCDsR-K8SP的构建通过PCR扩增出PolyA片段,连接到载体pMD19T-8S上构成中间克隆载体pMD19T-8S-PolyA。分别用KpnⅠ和SalⅠ(?)其与带有毛囊特异性启动子的载体pCDsR-KAP6-1-IGFⅠ双酶切后,重组成8S基因的毛囊特异性表达载体pCDsR-K8SP,经酶切鉴定与测序分析,结果与预期设计相符。2.8S基因毛囊特异性表达载体pCDsR-K8SP的细胞转染及鉴定在脂质体的介导下,将毛囊特异性表达载体pCDsR-K8SP分别转染入小鼠表皮细胞和绒山羊胎儿成纤维细胞中,经双重筛选获得阳性克隆。对转基因细胞基因组进行PCR特异性扩增检测,结果表明外源目的基因8S已稳定整合到转基因细胞基因组中。提取筛选得到的转基因小鼠表皮细胞及绒山羊胎儿成纤维细胞的总RNA,进行反转录PCR检测,结果表明外源基因8S在这两种转基因细胞中均呈现表达阳性。3.8S转基因小鼠胚胎干细胞的获得及转基因小鼠的制备通过转染小鼠胚胎干细胞,获得了外源基因8S已稳定整合到转基因细胞基因组中的阳性克隆,为下一步制备嵌合体小鼠奠定基础。同时使用载体pCDsR-K8SP对小鼠受精卵进行原核注射,获得67只待检原代小鼠,经PCR鉴定,共检测出6只8S转基因阳性小鼠,阳性得率为8.96%。本实验中8S转基因小鼠的制备及初步鉴定,为进一步研究人工合成蛛丝蛋白的特性以及利用生物工程方法开发蛛丝新型材料提供了研究基础。
【作者】薛娜；
【导师】郭旭东；梁浩；
【作者基本信息】内蒙古大学，动物学，2014，硕士
【关键词】八聚体蛛丝蛋白基因；毛囊特异性表达；细胞转染；原核注射；转基因小鼠；

【参考文献】
[1]张红霞.局部起旋式圆管螺旋流三维湍流的试验研究及数值模拟[D].太原理工大学,水力学及河流动力学,2004,硕士.
[2]师洪涛,杨静玲,丁茂生,王金梅.基于小波—BP神经网络的短期风电功率预测方法[J].电力系统自动化,2011,16:44-48.
[3]乔雪竹.中国双重国籍问题研究[D].中国社会科学院研究生院,法律,2014,硕士.
[4]李连子.信息生态系统视角下网络团购的演进及信息环境影响因素研究[D].吉林大学,图书情报,2013,硕士.
[5]张庆洋.会计师事务所规模对审计质量影响的实证研究[D].东北师范大学,会计学,2012,硕士.
[6]王婷,陈斌,姚文熙,吕征宇.异步电机无速度传感器控制的Holtz型磁链观测器性能分析[J].浙江大学学报(工学版),2014,09:1690-1695+1703.
[7]庞抗.无线车检器的接收设备研制[D].长安大学,控制理论与控制工程,2014,硕士.
[8]郑健.文化体制改革进程中村落武术文化研究[D].天津体育学院,民族传统体育,2013,硕士.
[9]杨丽.高考英语测试的句法分析能力共同量表实证研究[D].湖南师范大学,课程与教学论,2014,硕士.
[10]岳雨.探寻信用卡市场策略[D].对外经济贸易大学,2002.
[11]孙晓峰.快餐连锁店选址决策及经营绩效评估方法研究[D].合肥工业大学,物流工程,2013,硕士.
[12]黄占元.加拿大赖特山铁矿考察报告[J].国外金属矿山.1988(10)
[13]王永宽.汽车故障诊断知识库管理系统的研究[D].合肥工业大学,2004.
[14]王玉仓,王雪青,王三军,叶淑英.第一性原理研究锂修饰的类石墨烯碳氮纳米结构的储氢性能[J].郑州大学学报(理学版),2013,03:63-67.
[15]邓华.精准农业产量图分析方法研究与系统设计[D].南京信息工程大学,2005.
[16]印娅.农民工对《建党伟业》的解码研究[D].西南交通大学,影视创作研究,2014,硕士.
[17]韩丹.强流脉冲电子束40CrNiMo7钢表面改性实验研究[D].大连理工大学,凝聚态物理,2013,硕士.
[18]周雪莹.哈尔滨ZH超市营销策略研究[D].黑龙江大学,工商管理,2013,硕士.
[19]杜秀省.厌氧折流板反应器—潜流人工湿地处理生活污水及脱氮机理研究[D].河北工程大学,市政工程,2012,硕士.
[20]杨超.气体扩散电极孔道结构设计与电化学性能关系研究[D].北京化工大学,材料科学与工程,2013,硕士.
[21]谢晓忠.基于CTM的城市干道交叉口信号联动优化控制研究[D].重庆交通大学,交通运输规划与管理,2012,硕士.
[22]宗志刚.城市轨道交通网供电规划研究[D].天津大学,电气工程,2013,硕士.
[23]高秀艳.酚酸类化合物对大鼠离体胸主动脉环舒张作用的相关研究[D].河北医科大学,营养与食品卫生学,2013,硕士.
[24]俞王毛.在限制中寻求自由[D].南京师范大学,中国现当代文学,2014,博士.
[25]廖胜祥.自发荧光支气管镜在气道病变的临床应用研究[D].福建医科大学,肿瘤学,2014,硕士.
[26]罗二芳.自有品牌营销策略对消费者溢价支付意愿的影响研究[D].西南财经大学,流通经济学,2013,博士.
[27]李海霞.全面抗战初期国民政府的对德外交选择[D].曲阜师范大学,中国近现代史,2013,硕士.
[28]王鲜芳.生化过程动态建模及优化控制研究[D].江南大学,2009.
[29]阳剑.针对飞轮扰动的卫星减振技术研究[D].哈尔滨工业大学,飞行器设计,2013,硕士.
[30]贺驰光.非制冷红外焦平面温控电路设计[D].华中科技大学,通信与信息系统,2013,硕士.
[31]万莹.乳酸杆菌发酵液对人结肠癌细胞的抑制作用及其机理[D].大连医科大学,生物化学与分子生物学,2012,硕士.
[32]黄锐.显微镜下硬通道微创手术治疗基底节区高血压脑出血的临床应用研究[D].吉林大学,临床医学,2013,硕士.
[33]吴俊,方华京,李浚源,陈锦江.伺服电机的l~1最优抗扰控制器[J].控制与决策,1994,04:276-280.
[34]徐海顺.城市新区生态雨水基础设施规划理论、方法与应用研究[D].华东师范大学,生态学,2014,博士.
[35]刘文彬.市郊铁路线路车辆动力响应及线形参数研究[D].北京交通大学,2014.
[36]王荻.基于FPGA的图像处理系统设计[D].西安电子科技大学,检测技术与自动化装置,2011,硕士.
[37]甘路.购物中心交通空间复合化研究[D].华侨大学,建筑设计及其理论,2014,硕士.
[38]孙凡,钟章成.缙云山四川大头茶种群繁殖适应性的数量特征研究[J].植物生态学报,1997,01:3-6+9-10.
[39]隋连香.脑瘫青少年跨越障碍物的运动生物力学分析[D].鲁东大学,体育教育训练学,2013,硕士.
[40]孔德婧.黑龙江垦区稻米产业国际竞争力的研究[D].黑龙江八一农垦大学,农村与区域发展,2014,硕士.
[41]邓岁寒.中国大学生为什么消费美国奢侈食物品牌星巴克和哈根达斯[D].浙江大学,中国学,2013,硕士.
[42]刘羚慧.有机—无机肥料配施对大白菜产量及品质的影响[D].东北农业大学,植物营养学,2013,硕士.
[43]张永玲.乙二胺改性聚酰亚胺纳滤膜的制备和耐溶剂性能研究[D].哈尔滨工业大学,高分子化学与物理,2014,硕士.
[44]宋强.原位生长CNT掺杂碳/碳复合材料的组织和力学性能[D].西北工业大学,2014.
[45]刘苑.毛茛总苷抗心肌缺血作用、机制及有效部位研究[D].广东药学院,药剂学,2012,硕士.
[46]华佳.我国居民金融资产选择的影响因素分析[D].复旦大学,金融学,2012,硕士.
[47]马迪芳,陈旭东.软件工程方向基于课程群的实践课教学改革[J].计算机教育,2014,10:43-46.
[48]王永福.模块化设计理论及其在桥式起重机设计中的应用[D].大连理工大学,机械设计及理论,2004,硕士.
[49]朱志坤.航空复杂回转件高效数控加工工艺研究[D].南昌航空大学,航空宇航制造工程,2013,硕士.
[50]郑美娜.TCCD对脑动脉弹性早期评估价值的探讨[D].吉林大学,临床医学,2014,硕士.